La plate-forme P2R de production et purification de protéines recombinantes est l’un des pôles de l’axe protéomique du réseau des plate-formes du Grand Ouest Biogenouest. La plateforme est labellisée IBISA depuis le 25 Novembre 2020. Elle offre un large éventail de compétences pour la production et la purification de protéines recombinantes et d’anticorps natifs ou recombinants.
Expertises :
La plate-forme P2R propose son expertise pour la réalisation de projets de production de protéines recombinantes utilisées dans la recherche en santé. Nous produisons en routine et à façon, des complexes CMH/peptides de classe I classiques ou non classiques humains (HLA-A, HLA-B, HLA-E, Mic A,…), de souris et de rat pour visualiser ou trier des lymphocytes T CD8+ spécifiques (Télécharger le bon de commande pour toute demande de monomère CMH/peptide de classe I). La plate-forme est équipée pour la production de protéines recombinantes en systèmes procaryotes et eucaryotes et offre un service de purification de protéines, peptides et d’anticorps. L’ensemble des technologies de la plate-forme est disponible à différents niveaux pour les utilisateurs, soit pour une utilisation autonome des équipements après formation ou pour accompagner la conduite complète d’un projet de R&D de production/purification. Le personnel de la plate-forme dispose des compétences nécessaires pour mener à bien vos projets en production procaryote et eucaryote (échelle du milligramme au gramme) et en purification de protéines ou peptides par toutes les techniques de chromatographie liquide : exclusion stérique, échange d’ions, interactions hydrophobes, phase inverse, affinité.
La plate-forme propose également des lots de complexes CMH/peptide sensible aux UV permettant aux demandeurs de réaliser des criblages de peptides à moyen débit pour détecter de nouveaux épitopes ou mettre en évidence des populations T dans des réponses anti-tumorales, anti-virales, ou auto-immunes en transplantation. Les complexes formés peuvent être utilisés de la même manière que les lots de complexes CMH/peptide produits classiquement.
Contrôle qualité :
Tous les complexes CMH/peptide produits sont purifiés par chromatographie échangeuses d’ions et chromatographie d’exclusion. Les lots de complexes biotinylés sont validés par chromatographie d’exclusion et testé pour leur biotinylation.
Toutes les protéines produites et purifiées sont validées par chromatographie d’exclusion, gel d’acrylamide et peuvent être testées pour leur teneur en endotoxines bactériennes en fonction du cahier des charges rédigé avec le demandeur.
Une démarche qualité est en cours de mise en place en termes de traçabilité et de reproductibilité pour assurer les meilleurs résultats possibles aux demandeurs.
Test de la stabilité thermique et de l’agrégation des protéines par nanoDSF sur le Prometheus NT.48. Criblage des conditions de stockage des protéines (tampons, pH, température,…)
Contact :
Responsable scientifique
Frédéric Pécorari
Responsable technique
Karine Bernardeau
Personnel Plateforme
Klara Echasserieau
Equipements et systèmes
Systèmes de production :
– Système procaryote : Escherichia coli (BL21-DE3 et ses dérivés)
– Système eucaryote : CHO-K1, CHO-S, ExpiCHOTM (Gibco), cellules d’insectes S2, SF9
Equipements de production :
– Incubateur bactérien
– Incubateurs eucaryotes pour cellules de mammifères ou d’insectes : 2 statiques et 2 en agitation
– Bioréacteur à usage unique Eppendorf Celligen BluTM adaptable pour des cuves de 5L o 14L
– Système de filtration tangentielle SartoFlow study (Sartorius) avec une cuve de 10L
– Système de production acellulaire RTS (Roche)
Equipements de purification par chromatographie :
– 3 HPLC (1 GE Healthcare et 2 NGC BioRad) avec détecteur d’absorbance mono ou multi longueur d’onde, conductimètre, sonde pH en ligne, méthode scouting
– 1 FPLC entièrement réfrigéré dédié à la purification de protéines/anticorps à partir de gros volumes
– 1 Alliance Waters pour le contrôle analytique de peptide ou de protéine (SEC, phase inverse)
– 1 système Streamline de purification
Les équipements de chromatographie sont qualifiables en fonction des projets
Formation :
La plate-forme forme les étudiants ou personnels techniques aux techniques de production des protéines en système procaryote ou eucaryote ainsi qu’aux techniques de chromatographie liquide et à l’utilisation des équipements de la plate-forme.
Accès :
La plate-forme P2R est accessible aux équipes de recherche académiques et aux entreprises privées dans le cadre de prestations de service ou de collaborations scientifiques selon un cahier des charges validé avec le demandeur. Un suivi en temps réel de l’état d’avancement du service est effectué lors d’échanges réguliers avec le demandeur. Livraison des échantillons par un transporteur à la charge du demandeur.
Nous contacter pour toute demande de faisabilité de projet et de devis.
Mots clés :
Production / purification / protéines recombinantes / chromatographie / peptides / conseil / anticorps / bioréacteur / formation / HPLC / CMH/peptide
Domaines d’application :
– Santé
– Immunothérapie, Biothérapies
– Biotechnologies-Ingénierie des protéines
– Recherche fondamentale et appliquée
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